NoncodingRNA重要包含miRNA，lncRNA及circRNA，是近来几年的热点协商范围。其精深参加性命运动的各类调理进程，且不编码卵白，又被称为生物界的暗物资。miRNA暂时曾经协商的相对老练，其重要效用是分离在基因的3’UTR区，负向调理基因的表白。
LncRNA及circRNA是近期协商的重要体例，lncRNA的效用形式暂时重要有Signal、Decoy、Guide及Scaffold，而circRNA做为一种更安稳ncRNA，因其富含miRNA的分离位点，能够表现miRNAsponge的功效。miRNAsponge又被称为ceRNA，是一种自年以来被精深协商的一种RNA间的调控机制。
本日为众人带来一篇Circulation的文章，题目是“CircularNoncodingRNAHIPK3MediatesRetinalVascularDysfunctioninDiabetesMellitus”。分离题目及择要，该文章的
疾病是糖尿病视网膜病变，
主变量分子是circHIPK3，
表型是血管内皮细胞的功效（活性、增殖、迁徙及成管），
机制是ceRNA（miRNASponge），
科学假定是：c-myb→circHIPK3→miR-30a-3p→VEGFC/WNT2/FZD调控视网膜血管内皮细胞的功效，进而增进糖尿病视网膜病变的产生进展。
本文论证逻辑谨严（增长材猜中的Figure抵达24个），包含了分子、细胞、动物、布局四个维度，体例包含如下几个部份：
第一部份，包含Fig1、7、S1、S2、S3，考证circHIPK3的表白及在糖网中的表白不同；
第二部份，包含Fig2、5、S6、S7、S8、S23，经过gainoffunction及lossoffunction考证表型；
第三部份，包含Fig5，追寻circHIPK3上游启动机制；
第四部份，包含Fig3、S9-15、S24，追寻circHIPK3下游调控机制；
第五部份，包含Fig4、6、S17-21，机制的表型考证；
接下来详细看一下数据：
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考证circHIPK3的表白及再糖网中的表白不同
S1、S3：血管内皮细胞中存在circHIPK3表白；S2：circHIPK3在人与小鼠直接高度保守Fig1circHIPK3的表白特色A、B：布局和细胞水准考证circHIPK3的表白；C:测序考证序列；D、E：circHIPK3较HIPK3mRNA更安稳；F、G：circHIPK3重要定位于细胞质；H、I：在动物和细胞水准考证circHIPK3在糖网中表白抬高。Fig7circHIPK3在糖尿病视网膜病变患者中高表白A、B、D：circHIPK3在糖尿病患者的视网膜前膜、房水、血清中表白抬高；C：circHIPK3在糖尿病患者外周血细胞中表白不抬高。2
经过“正反实行”考证表型Fig2、S6、S7敲降circHIPK3考证表型Fig2A：siRNA1、SiRNA3低沉circHIPK3内源性表白；Fig2B、S6A：敲降circHIPK3统制细胞增殖；Fig2C、S6B：敲降circHIPK3统制细胞迁徙；Fig2D、S6C：敲降circHIPK3统制细胞迁徙；Fig2E、S6D：敲降circHIPK3统制细胞成管；S7：在高糖处境下敲降circHIPK3统制细胞活性、增殖、迁徙、成管。FigS8过表白circHIPK3考证表型A：过表白circHIPK3；B：过表白circHIPK3增进细胞活性；C：过表白circHIPK3增进细胞增殖；D：过表白circHIPK3增进细胞迁徙；E：过表白circHIPK3增进细胞成管。Fig5敲降circHIPK3加重糖网中内皮细胞损伤A：建立奇异性敲降circHIPK3的shRNA；B:动物水准考证敲降circHIPK3后糖网小鼠视网膜血管增生加重；C动物水准考证敲降circHIPK3后糖网小鼠视网膜血管渗出加重。S23：动物水准考证过表白circHIPK3后加剧糖网小鼠视网膜血管增生及渗出。3
机制部份，追寻circHIPK3上游启动机制S5转录因子c-myb为circHIPK3上游启动要素A：c-myb在高糖处境下表白抬高；B：PCR考证敲降c-myb后circHIPK3表白降落；C：ChIP考证高糖处境下c-myb与编码circHIPK3基因的启动子分离；D：Luciferaseassay考证c-myb与编码circHIPK3基因的启动子分离。4
追寻circHIPK3下游调控机制Fig3、S9circHIPK3与3种miRNA分离表现调控效用Fig3A：RIP考证circHIPK3与AGO2分离；Fig3B：Luciferaseassay考证circHIPK3与3种miRNA存在分离；Fig3C：Rescue，渐变分离位点考证circHIPK3与3种miRNA的分离；Fig3D：RIP-qPCR考证circHIPK3与3种miRNA存在分离；S9B：IF考证circHIPK3与3种miRNA存在共定位。S12、S种miRNA下游靶基因考证S12：PCR考证过表白3种miRNA后VEGFC、FZD4、WNT2基因表白降落；S13：PCR考证过表白3种miRNA表态关血管生成因子无显然变动。S14：Luciferaseassay考证3种miRNA与VEGFC、FZD4、WNT2的3’UTR区分离；S15：考证敲降circHIPK3后VEGFC、FZD4、WNT2基因表白低沉。S24circHIPK3，miR-30a-3p，VEGFC/FZD4/WNT2三者存在互相效用A：动物水准考证统制miR-30a-3p增长VEGFC、FZD4、WNT2基因表白；B、C：动物水准考证经过RIP-qPCR考证miR-30a-3p别离与circHIPK3及VEGFC/FZD4/WNT2三者存在互相效用；D：动物水准考证VEGFC/FZD4/WNT2表白；E：动物水准考证敲降circHIPK3后，VEGFC、FZD4、WNT2的表白降落。5
机制的表型考证S18：统制miR-30-3p增长细胞活性、增殖、迁徙及成管技能；S19：高糖处境下统制miR-30-3p增长细胞活性、增殖、迁徙及成管技能。Fig4circHIPK3-miR-30a-3p调控视网膜血管内皮细胞功效A：经过Rescue操纵circHIPK3及miR-30-3p考证两者互相效用调控细胞活性；B：经过Rescue操纵circHIPK3及miR-30-3p考证两者互相效用调控细胞增殖；C、D：经过Rescue操纵circHIPK3及miR-30-3p考证两者互相效用调控细胞成管。S17：经过Rescue操纵circHIPK3及miR-30-3p考证高糖处境下两者互相效用调控细胞活性、增殖、迁徙及成管。S20：经过Rescue操纵circHIPK3及VEGF考证两者互相效用调控细胞活性、增殖、迁徙及成管技能。S21：经过Rescue操纵circHIPK3、WNT2/FZD4考证两者互相效用调控细胞活性、增殖、迁徙及成管技能。6
归纳本文是一个分子+分子+分子+分子的四元变量布局，此中包含一组转录调控（卵白-DNA交互）以及ceRNA调控（RNA-RNA交互），论证了主变量分子circHIPK3经过比赛性分离miR-30-3p调控VEGFC/FZD4/WNT2表白，而自己遭到上游转录因子c-myb的调控，进而增进糖尿病视网膜病变的产生进展。本文分为如下几步论证：单变量论证：circHIPK3、miR-30-3p调控血管内皮细胞的功效（活性、增殖、迁徙、成管）及糖网中血管的增生及渗出。二元变量论证：circHIPK3经过miR-30-3p调控视网膜血管内皮细胞功效，circHIPK3经过VEGF/WNT2/FZD4调控视网膜血管内皮细胞功效。直接效用论证：经过ChIP、Luciferaseassay考证c-myb与circHIPK3启动子地域的分离；经过RIP、Luciferaseassay正反考证miR-30-3p与circHIPK3，miR-30-3p与VEGF/WNT2/FZD4的分离。天职之是以能发在Circulation这类血汗管范围顶级期刊上，首先是由于主变量circHIPK3特别别致，其在糖尿病视网膜病变产生进展中的效用是初度报导；其次，本文论证充足，数据踏实，包含了临床、细胞、动物、分子四个维度，每个维度都从多个角度采纳多种实行办法来论证；并且，本文有2组直接效用机制，实行用到了RIP、ChIP、Luciferaseassay等对比高档的实验办法；结尾，circHIPK3自己存在于外周血中，且外周血中的含量与疾病具备关系性，具备进一步运用于液态活检中的潜力。好了，这篇文件就分享到这边，盼望众人都能成效好的成果。—END—预览时标签不行点收录于合集#个